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凱氏定氮法結合前處理技術測定飼料真蛋白含量的應用

飼料中蛋白質含量是衡量其營養價值的核心指標,但傳統粗蛋白檢測常受非蛋白氮干擾,無法真實反映飼料對動物的實際營養價值。本文采用凱氏定氮法結合前處理工藝,精準測定飼料中蛋白含量,為飼料品質鑒定提供可靠方法。


凱氏定氮法結合前處理技術測定飼料真蛋白含量的應用


一、實驗原理與材料準備

測定原理
在催化劑(如硫酸銅等)作用下,樣品經濃硫酸高溫消化,有機氮被氧化、分解并轉化為無機銨鹽 。隨后加入強堿(如氫氧化鈉)營造堿性環境,銨鹽與堿反應釋放出氨,氨隨水蒸氣蒸餾分離,被過量硼酸溶液吸收 。吸收氨后的硼酸溶液,用已知濃度的鹽酸或硫酸標準溶液滴定,依據酸堿反應的計量關系,通過消耗酸的量計算樣品中氮的含量 ,完成從有機氮到可測氮量的轉化與定量分析 。

儀器與試劑
儀器:粉碎機; 感量0.1mg分析天平; 格丹納 N810免水全自動凱氏定氮儀; DNS-20石墨消解爐;
試劑:98%濃硫酸、10%硫酸銅溶液、40%氫氧化鈉溶液、2.5%氫氧化鈉溶液、20g/L硼酸、0.1011mol/L硫酸標準溶液等。


二、實驗步驟

樣品前處理

將風干飼料粉碎后過40目篩,精確稱取約0.5g試樣(精確至0.0001g)置于250mL燒杯中,加入75mL蒸餾水,加熱至沸并保持30分鐘。

依次加入2.5%氫氧化鈉溶液20mL和10%硫酸銅溶液20mL,充分攪拌后微沸,冷卻放置2小時以上。

用定性濾紙過濾,用70-80℃熱水沖洗沉淀5次以上,直至用5%氯化鋇溶液和鹽酸檢查濾液無白色硫酸鋇沉淀(確認洗滌干凈)。

將沉淀與濾紙在65℃烘箱中烘干。同時設置對照樣品:樣品不做沉淀處理直接消化,其兩個樣品添加0.0636g尿素,添加0.1135g硫酸銨。

消化與檢測

消化:將干燥后的沉淀與濾紙放入消化管,加入15mL濃硫酸、3g硫酸鉀和0.2g硫酸銅,采用梯度升溫程序(200℃/30min→320℃/30min→400℃/90min)在石墨消解爐上消化,同時做空白試驗。

測試:將冷卻后的消化管置于免水全自動凱氏定氮儀,設置參數為硼酸20mL、堿60mL、稀釋水10mL,開始蒸餾,自動計算并打印結果。


三、結果與分析

空白與粗蛋白測定

樣品空白消耗滴定酸體積平均值為0.5421mL,為結果校正提供基準。
未處理樣品的粗蛋白含量平均值為15.5480%,反映了包含非蛋白氮的總含氮量。

真蛋白測定結果

經沉淀處理的樣品中,因過濾損失結果偏低,舍去后其余樣品真蛋白含量平均值為13.6072%。
對比可知,粗蛋白與真蛋白含量相差近2%,表明飼料中存在非蛋白氮成分。加尿素和加硫酸銨的真蛋白含量與其他樣品接近,驗證了該方法能有效排除非蛋白氮干擾。

結論

該方法通過前處理去除非蛋白氮,結合凱氏定氮法精準測定真蛋白,操作可行、結果可靠,可用于飼料真蛋白的實際檢測。本方法僅供參考。

參考方法
GB/T 6432 - 2018《飼料中粗蛋白的測定 凱氏定氮法》

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